9L/lacZ大鼠膠質(zhì)肉瘤細(xì)胞
,9LlacZ
貨號(hào)：YJ-r037（種屬鑒定）
價(jià)格： 1500.0
規(guī)格： 1*10 6
細(xì)胞介紹
9L/lacZ細(xì)胞株1989年從9L細(xì)胞株（大鼠硝基脲誘導(dǎo)的膠質(zhì)瘤細(xì)胞株）發(fā)展而來(lái)。 用攜帶E. coli編碼beta-半乳糖苷酶lacZ基因和帶來(lái)G418抗性的Tn5新霉素基因BAG復(fù)制缺陷的逆轉(zhuǎn)錄病毒載體感染9L細(xì)胞株。 細(xì)胞在G418存在下培養(yǎng)14天，克隆，并檢測(cè)beta-半乳糖苷酶生成。 9L/lacZ產(chǎn)生高水平的酶，選擇其進(jìn)行后續(xù)研究。 細(xì)胞持續(xù)表達(dá)lacZ報(bào)告基因產(chǎn)物，從E. coli衍生來(lái)的beta-半乳糖苷酶，從而可以通過(guò)組織切片的組織化學(xué)染色來(lái)鑒定單個(gè)腫瘤細(xì)胞。 同一片子上的淋巴細(xì)胞和其它響應(yīng)細(xì)胞也可以通過(guò)雙標(biāo)記抗體進(jìn)行鑒定。 染色細(xì)胞和背景的對(duì)比有益于圖像分析。 這是少數(shù)允許量化分析的大腦微觀腫瘤模型中的一種。 這種腫瘤模仿了人類(lèi)大腦腫瘤的生長(zhǎng)和傳播的重要特性。 beta-半乳糖苷酶的表達(dá)十分穩(wěn)定，但細(xì)胞培養(yǎng)數(shù)月后應(yīng)該重新進(jìn)行克隆。
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1) 準(zhǔn)備：1640 基礎(chǔ)培養(yǎng)基(推薦：YJ-0002)，優(yōu)質(zhì)胎牛血清10 %，P/S 1 %
2) 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3) 凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。
二．細(xì)胞處理：
1） 凍存細(xì)胞的復(fù)蘇：
將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過(guò)夜。第二天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況和細(xì)胞密度。
2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
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