細胞分離是指將組織分散制成細胞懸液后從中獲取目的細胞的過程。細胞純化更進一步強調(diào)從原代培養(yǎng)前成分混雜的異質(zhì)性細胞懸液中或者從培養(yǎng)物中獲得單一類型細胞的過程。
分離和純化細胞的過程不僅僅在原代培養(yǎng)之前進行的，有時分離和純化細胞的過程還貫穿于原代培養(yǎng)和繼代培養(yǎng)的過程中，甚至是主要依賴培養(yǎng)過程實現(xiàn)分離和純化細胞的目的。
細胞分離液是一種經(jīng)過聚乙烯吡咯烷酮處理過的硅膠顆粒，經(jīng)過高速離心后可形成連續(xù)密度梯度，由于Percoll擴散常數(shù)低，所形成的梯度十分穩(wěn)定。分離液采用預先形成的密度梯度時可在低離心力(200～1000g)于數(shù)分至數(shù)十分鐘內(nèi)達到滿意的細胞分離結(jié)果。此外，分離液不穿透生物膜，對細胞無毒害，因此廣泛用于分離細胞、亞細胞成分、細菌及病毒，還可將受損細胞及其碎片與完好的活細胞分離。常用于分離和傳話植物原生質(zhì)體、核、葉綠體、和線粒體。
細胞分離液的配置與使用
1、不同濃度(密度)分離液的制備:先用9份分離液與1份8.5％NaCl或1.5MPBS混合達到生理性滲透壓，然后用生理溶液(0.85％NaCl或0.15MPBS)稀釋到所需濃度。
2、不連續(xù)密度梯度層的制備:先將試管壁用牛血清濕潤，除去多余血清，這種預處理可使逐層疊加的液平穩(wěn)沿管壁流下，使形成滿意的界面。在制備過程中一般用長針頭注射器從高密度向低密度逐層放置，有時相鄰兩層比重相差不大時，可將液放入注射器中，小針頭斜面緊貼管壁，任其自然慢慢流下。
3、裝樣：樣品體積和細胞濃度根據(jù)不同細胞而異，一般加樣體積不宜過大，細胞濃度也不可過高，否則會影響細胞的分離和回收。
4、離心：一般采用離心力為400g，時間20～25min。由于多層之間密度差別不大，因此離心機加速、降速時要慢，要平穩(wěn)。
5、取樣：當所要分離的細胞絕大部分在兩層的界面時，可逐層去除液后收集界面部位的細胞;有時大部分細胞位于層中,則需要逐層收集。收獲含有液的細胞經(jīng)2次洗滌后可供培養(yǎng)或檢測用。
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